標準曲線的本質

　　分析檢測中的標準曲線是指一系列已知含量(濃度/量)的物質與儀器響應/信號之間的關系，數學處理就是曲線方程，圖形表示就是標準曲線。標準曲線的目的是可以根據標準曲線查出待測物質的含量。當我們得到一系列已知含量的物質的響應后，就會去建立函數關系，數學上稱曲線擬合，由于直線最為簡單，所以常常用直線方程加以擬合，實驗室認可當然會用到多項式擬合等其他方式。

　　標準曲(qu)線的核心問題要(yao)解決：

　　1.能找到確切(qie)濃度(du)的(de)標準物質或標準品;

　　2.標(biao)(biao)準(zhun)系列(lie)和(he)(he)待測物質一(yi)(yi)定要有(you)(you)相同和(he)(he)一(yi)(yi)致的(de)(de)(de)基(ji)(ji)體(ti)(ti)，因(yin)為樣品基(ji)(ji)體(ti)(ti)可(ke)能(neng)會干(gan)擾儀器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)響應(ying)，從這個意義上講，樣品的(de)(de)(de)前處(chu)理實(shi)(shi)際就是(shi)(shi)提(ti)供標(biao)(biao)準(zhun)和(he)(he)樣品同樣的(de)(de)(de)基(ji)(ji)體(ti)(ti)環境(jing)，盡量祛除干(gan)擾基(ji)(ji)體(ti)(ti)。所以最好的(de)(de)(de)標(biao)(biao)準(zhun)系列(lie)應(ying)該(gai)(gai)是(shi)(shi)樣品基(ji)(ji)體(ti)(ti)匹(pi)配(pei)的(de)(de)(de)標(biao)(biao)準(zhun)系列(lie)。而方法(fa)建(jian)立過程中(zhong)首(shou)先要考(kao)慮(lv)的(de)(de)(de)當然是(shi)(shi)基(ji)(ji)體(ti)(ti)干(gan)擾的(de)(de)(de)問題(ti)，推(tui)薦(jian)用(yong)(yong)標(biao)(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)(ru)曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)和(he)(he)Youden曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)分別(bie)考(kao)察(cha)樣品基(ji)(ji)體(ti)(ti)所帶來的(de)(de)(de)乘積性(xing)干(gan)擾和(he)(he)加(jia)和(he)(he)性(xing)干(gan)擾。標(biao)(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)(ru)曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)就是(shi)(shi)在樣品中(zhong)加(jia)入(ru)(ru)一(yi)(yi)系列(lie)標(biao)(biao)準(zhun)，然后考(kao)察(cha)該(gai)(gai)標(biao)(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)(ru)曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)和(he)(he)標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)斜率的(de)(de)(de)統(tong)計學差異，若有(you)(you)差異需考(kao)慮(lv)用(yong)(yong)標(biao)(biao)準(zhun)加(jia)入(ru)(ru)法(fa)定量;而Youden曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)就是(shi)(shi)對(dui)樣品做一(yi)(yi)系列(lie)稀釋，然后用(yong)(yong)稀釋倍數如1/10、1/5、1/2、1對(dui)儀器(qi)(qi)(qi)響應(ying)做曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)，考(kao)察(cha)該(gai)(gai)Youden曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)的(de)(de)(de)截(jie)距(ju)與(yu)0的(de)(de)(de)差別(bie)，若有(you)(you)差別(bie)則(ze)提(ti)示有(you)(you)加(jia)和(he)(he)性(xing)干(gan)擾，此時測定值要減(jian)去該(gai)(gai)截(jie)距(ju)才(cai)是(shi)(shi)真(zhen)實(shi)(shi)值。只有(you)(you)解(jie)決了標(biao)(biao)準(zhun)曲(qu)(qu)(qu)線(xian)(xian)與(yu)樣品基(ji)(ji)體(ti)(ti)的(de)(de)(de)匹(pi)配(pei)問題(ti)，我們的(de)(de)(de)定量才(cai)可(ke)靠。內標(biao)(biao)法(fa)和(he)(he)替代(dai)物的(de)(de)(de)使用(yong)(yong)則(ze)是(shi)(shi)為了解(jie)決儀器(qi)(qi)(qi)和(he)(he)前處(chu)理的(de)(de)(de)影(ying)響問題(ti);

　　標(biao)準曲(qu)線的做法

　　按GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》推薦：

　　1.標(biao)準曲線的濃度范(fan)(fan)圍應覆(fu)蓋正常操作條(tiao)件下(xia)的被測量范(fan)(fan)圍;

　　2.標準樣品的組(zu)分(fen)盡量與被測樣品組(zu)分(fen)一(yi)致;

　　3.標(biao)準樣品(pin)的濃(nong)度值應等距離的分布在被測(ce)量范(fan)圍;

　　4.標準樣品的(de)個數(shu)至(zhi)少應有3個濃度(du);

　　5.每個(ge)標準點至少重復(fu)2次，這個(ge)重復(fu)是指從稀釋開(kai)始;

　　如果國家(jia)標(biao)準(zhun)有相應的濃度系列(lie)推薦，盡量按國家(jia)標(biao)準(zhun)，如果你要偷(tou)懶，比如我(wo)要減少標(biao)準(zhun)點，至(zhi)少要有理論(lun)標(biao)準(zhun)支撐，比如至(zhi)少要3個濃度。工作中我(wo)們經(jing)常采(cai)用線性(xing)校準(zhun)，因為線性(xing)方程最為簡(jian)潔。

　　標準(zhun)曲(qu)線的檢(jian)驗

　　標準(zhun)(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)檢(jian)驗(yan)(yan)是實(shi)際操作中最大的(de)(de)(de)(de)難(nan)點(dian)，也是工作中誤(wu)區和爭議(yi)最多(duo)的(de)(de)(de)(de)話題，比(bi)如，GB/T 5750.3-2006就將(jiang)標準(zhun)(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)檢(jian)驗(yan)(yan)分為：精(jing)密度檢(jian)驗(yan)(yan)，截距檢(jian)驗(yan)(yan)和斜率檢(jian)驗(yan)(yan)，但，并未出(chu)示(shi)具體的(de)(de)(de)(de)檢(jian)驗(yan)(yan)方(fang)法(fa)。首先(xian)講講這三(san)個(ge)檢(jian)驗(yan)(yan)，標準(zhun)(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)(xian)的(de)(de)(de)(de)精(jing)密度檢(jian)驗(yan)(yan)，實(shi)際含(han)義就是做出(chu)來的(de)(de)(de)(de)試(shi)驗(yan)(yan)點(dian)在我擬合的(de)(de)(de)(de)直(zhi)線(xian)(xian)方(fang)程左右的(de)(de)(de)(de)分布情況，標準(zhun)(zhun)曲(qu)(qu)線(xian)(xian)是所(suo)有點(dian)以最小二乘算法(fa)(OLS)擬合出(chu)來的(de)(de)(de)(de)，這條曲(qu)(qu)線(xian)(xian)到所(suo)有點(dian)的(de)(de)(de)(de)垂直(zhi)距離的(de)(de)(de)(de)和(殘差)是最小的(de)(de)(de)(de)。

　　因此，這(zhe)條曲線(xian)(xian)并非通過(guo)所(suo)有點而是(shi)非常接近所(suo)有點，精密度檢驗(yan)就是(shi)看這(zhe)些試驗(yan)點距(ju)離擬(ni)合的直線(xian)(xian)的距(ju)離有無異常，所(suo)以(yi)也稱線(xian)(xian)性檢驗(yan)(擬(ni)合檢驗(yan))。這(zhe)時的精密度(線(xian)(xian)性檢驗(yan))需用F檢驗(yan)，P<0.05作為線(xian)(xian)性檢驗(yan)合格的標準。

　　標準曲線的(de)截距檢驗和斜率檢驗分別考(kao)察(cha)Y=a+bX中a和b與0的(de)統計學差異，a與0有差別說明有試劑(ji)空白或系統誤(wu)差，而(er)b若(ruo)與0沒差別說明儀器的(de)靈敏度(du)根本(ben)達不(bu)到分析要求。日常(chang)工作中我們(men)通常(chang)用(yong)相關系數來作為標準曲線好(hao)壞的(de)標準，這點有一定道(dao)理，但并不(bu)全面(mian)。

　　決定(ding)系數(shu)(shu)(shu)是(shi)相關系數(shu)(shu)(shu)的(de)(de)平(ping)方(fang)，就(jiu)(jiu)是(shi)我(wo)(wo)們經常(chang)在儀器軟件中看到的(de)(de)R2或Fit，它(ta)提示的(de)(de)是(shi)我(wo)(wo)建(jian)立的(de)(de)回(hui)(hui)歸方(fang)程(cheng)所(suo)解(jie)釋(shi)X對Y變(bian)化占Y變(bian)量的(de)(de)比值(zhi)，比如決定(ding)系數(shu)(shu)(shu)是(shi)0.99也(ye)就(jiu)(jiu)是(shi)說(shuo)我(wo)(wo)這(zhe)個(ge)回(hui)(hui)歸方(fang)程(cheng)可以解(jie)釋(shi)Y變(bian)化的(de)(de)99%，剩(sheng)下的(de)(de)1%就(jiu)(jiu)是(shi)殘(can)差。前(qian)面提到的(de)(de)精密度(線(xian)性檢(jian)驗)就(jiu)(jiu)是(shi)用這(zhe)兩部分的(de)(de)變(bian)化做(zuo)F檢(jian)驗，由(you)(you)于統計檢(jian)驗的(de)(de)臨界值(zhi)比較大，通常(chang)0.90以上的(de)(de)相關系數(shu)(shu)(shu)都會通過這(zhe)個(ge)F檢(jian)驗，當然還與實驗點數(shu)(shu)(shu)(自由(you)(you)度)有(you)關。

　　這(zhe)里要(yao)提(ti)到(dao)GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中關于失(shi)擬(ni)檢(jian)驗(yan)(yan)的問(wen)題(ti)，這(zhe)里的失(shi)擬(ni)檢(jian)驗(yan)(yan)是要(yao)看(kan)曲線擬(ni)合(he)后(hou)剩下殘(can)差(cha)與實(shi)驗(yan)(yan)數(shu)據本(ben)身(shen)隨機誤(wu)差(cha)(變(bian)異(yi))之間(jian)的差(cha)別(bie)，同(tong)樣采用(yong)F檢(jian)驗(yan)(yan)，此(ci)時失(shi)擬(ni)檢(jian)驗(yan)(yan)P應該>0.05，也就(jiu)是說殘(can)差(cha)應該跟(gen)實(shi)驗(yan)(yan)測定(ding)中的隨機誤(wu)差(cha)(變(bian)異(yi))沒(mei)有差(cha)別(bie)，你要(yao)看(kan)每次測定(ding)的隨機誤(wu)差(cha)(變(bian)異(yi))就(jiu)必須(xu)多次測定(ding)同(tong)一濃度(du)，因此(ci)失(shi)擬(ni)檢(jian)驗(yan)(yan)要(yao)求(qiu)每個濃度(du)點至少(shao)重復(fu)2次。

　　除(chu)此之外，最后(hou)我們(men)還(huan)要看看這些殘(can)差的(de)分布是(shi)否是(shi)正態(tai)的(de)，因為，正態(tai)才符合(he)隨機(ji)誤差的(de)特性。綜上(shang)所述，標準曲線(xian)的(de)檢(jian)(jian)驗應該是(shi)線(xian)性檢(jian)(jian)驗結(jie)合(he)失擬檢(jian)(jian)驗，以及殘(can)差的(de)正態(tai)性檢(jian)(jian)驗結(jie)合(he)才是(shi)統(tong)計學上(shang)比較完備的(de)。

　　通(tong)常我(wo)們采用的相關系(xi)(xi)數(shu)(shu)0.99以上的說法缺乏統(tong)計完(wan)備性。正如(ru)大家(jia)經常看到的改變擬合的參(can)數(shu)(shu)個數(shu)(shu)，如(ru)二次(ci)方(fang)程明顯能提高相關系(xi)(xi)數(shu)(shu)，但是我(wo)們經常沒(mei)有勇氣去用二次(ci)曲線(xian)方(fang)程，因為你(ni)沒(mei)有統(tong)計學(xue)上完(wan)備的支(zhi)撐。如(ru)果你(ni)發現標(biao)準曲線(xian)在低濃度(du)和高濃度(du)點(dian)的變異程度(du)不同(非等方(fang)差)，此時你(ni)應該(gai)考慮(lv)權重最小二乘(WLS)。

　　標(biao)準曲線使(shi)用中的問題

　　1.標(biao)準曲線需要人為(wei)的增(zeng)加(0,0)點嗎?

　　不(bu)能。通常的(de)標(biao)(biao)準系列多是配制0,1,2,3mg/L系列這樣的(de)說法，沒(mei)做實(shi)(shi)驗人為添(tian)加(0,0)很(hen)不(bu)妥，因(yin)為很(hen)多時(shi)候0管(guan)進(jin)入儀器可能也(ye)有響應(ying)值，這也(ye)是我們考(kao)察(cha)試劑空白(bai)的(de)一(yi)個重(zhong)要(yao)步驟。這個0管(guan)在某些時(shi)候非(fei)常重(zhong)要(yao)，比如全血(xue)鉛(qian)測定(ding)，我們采用牛(niu)血(xue)清來基體匹配標(biao)(biao)準系列，如果此(ci)時(shi)你用酸做空白(bai)或沒(mei)做實(shi)(shi)驗人為添(tian)加(0,0)，那你就很(hen)難做好標(biao)(biao)準曲線(xian)。所以標(biao)(biao)準曲線(xian)的(de)0管(guan)也(ye)是做好標(biao)(biao)準曲線(xian)的(de)重(zhong)要(yao)考(kao)慮點。

　　2.標準曲(qu)線(xian)需要減(jian)掉試劑空白來做嗎?

　　不需要(yao)。儀器(qi)測(ce)出(chu)來標(biao)準(zhun)系列(lie)的(de)響(xiang)應值(zhi)(zhi)可以(yi)減掉(diao)試劑空白(bai)或減掉(diao)0管的(de)響(xiang)應值(zhi)(zhi)來做，工作(zuo)中我(wo)們也常用0管來做儀器(qi)調零。其實沒(mei)有(you)必要(yao)那么麻煩，即使空白(bai)或0管有(you)響(xiang)應值(zhi)(zhi)，在構(gou)建標(biao)準(zhun)曲(qu)線時，我(wo)們已經認為該響(xiang)應值(zhi)(zhi)就(jiu)是(shi)0濃度(du)，也就(jiu)是(shi)扣除(chu)了這個空白(bai)的(de)。

　　3.什么時候用Y=bX和二次曲(qu)線呢?

　　標準曲(qu)線(xian)(xian)我(wo)們通常采用(yong)的(de)(de)(de)是(shi)Y=a+bX，曲(qu)線(xian)(xian)擬(ni)(ni)合(he)(he)完(wan)必須要(yao)(yao)做(zuo)(zuo)統計檢驗，且(qie)要(yao)(yao)做(zuo)(zuo)統計完(wan)備的(de)(de)(de)線(xian)(xian)性(xing)檢驗和(he)(he)(he)失(shi)擬(ni)(ni)檢驗，然后(hou)再做(zuo)(zuo)a與(yu)0的(de)(de)(de)差(cha)別檢驗，如(ru)(ru)果a與(yu)0的(de)(de)(de)統計學上無差(cha)異，你就可以(yi)考慮(lv)用(yong)Y=bX的(de)(de)(de)擬(ni)(ni)合(he)(he)曲(qu)線(xian)(xian)，擬(ni)(ni)合(he)(he)出來(lai)后(hou)同(tong)樣(yang)做(zuo)(zuo)線(xian)(xian)性(xing)檢驗和(he)(he)(he)失(shi)擬(ni)(ni)檢驗，如(ru)(ru)果線(xian)(xian)性(xing)檢驗合(he)(he)格(P<0.05)且(qie)失(shi)擬(ni)(ni)檢驗合(he)(he)格(P>0.05)此時你就可以(yi)采用(yong)Y=bX。二次曲(qu)線(xian)(xian)的(de)(de)(de)采用(yong)同(tong)樣(yang)是(shi)這(zhe)樣(yang)的(de)(de)(de)道理，如(ru)(ru)果你Y=a+bX時擬(ni)(ni)合(he)(he)不(bu)合(he)(he)格，你就考慮(lv)用(yong)Y=a+bX+cX2，同(tong)樣(yang)做(zuo)(zuo)失(shi)擬(ni)(ni)檢驗，考察擬(ni)(ni)合(he)(he)的(de)(de)(de)符合(he)(he)情況。如(ru)(ru)果Y=a+bX 和(he)(he)(he)Y=a+bX+cX2都滿(man)足擬(ni)(ni)合(he)(he)檢驗和(he)(he)(he)失(shi)擬(ni)(ni)檢驗合(he)(he)格，則采用(yong)Y=a+bX形式(shi)，這(zhe)樣(yang)符合(he)(he)統計學上參數最(zui)少的(de)(de)(de)統計簡(jian)潔性(xing)原則。

　　4.標準曲線去查含量(liang)時(shi)是先減空白信(xin)號算(suan)樣品含量(liang)還是先算(suan)出(chu)空白含量(liang)相減呢?

　　工作(zuo)中我們常(chang)要減(jian)(jian)(jian)掉空(kong)白得(de)到樣(yang)品含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)，現(xian)有(you)國家(jia)標準方法有(you)的(de)(de)(de)(de)推(tui)薦(jian)先算(suan)(suan)出空(kong)白含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)，用樣(yang)品含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)相減(jian)(jian)(jian)，也(ye)有(you)推(tui)薦(jian)先用樣(yang)品信(xin)號(hao)(hao)減(jian)(jian)(jian)空(kong)白信(xin)號(hao)(hao)然后去標準曲線(xian)推(tui)算(suan)(suan)含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)。而且這(zhe)兩種算(suan)(suan)法常(chang)常(chang)差距很(hen)大。其實這(zhe)種差距往往是低含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)水平時(shi)才(cai)出現(xian)，在低含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)水平通過(guo)標準曲線(xian)推(tui)算(suan)(suan)含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)時(shi)，本身不確(que)(que)定(ding)(ding)度就(jiu)很(hen)大。這(zhe)兩種方法都(dou)可以(yi)。個人(ren)推(tui)薦(jian)先用樣(yang)品信(xin)號(hao)(hao)減(jian)(jian)(jian)空(kong)白信(xin)號(hao)(hao)然后去標準曲線(xian)推(tui)算(suan)(suan)含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)，因為(wei)這(zhe)樣(yang)出來的(de)(de)(de)(de)含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)不確(que)(que)定(ding)(ding)度要小一些，而先算(suan)(suan)出空(kong)白含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)再相減(jian)(jian)(jian)就(jiu)增加了1次標準曲線(xian)推(tui)算(suan)(suan)含(han)(han)量(liang)(liang)(liang)時(shi)的(de)(de)(de)(de)不確(que)(que)定(ding)(ding)度，因為(wei)好的(de)(de)(de)(de)測量(liang)(liang)(liang)永遠是不確(que)(que)定(ding)(ding)度小的(de)(de)(de)(de)測量(liang)(liang)(liang)。

　　5.如何做兩條標(biao)準曲線的檢驗呢?

　　先從原理上講：判斷兩(liang)(liang)(liang)條或(huo)多(duo)條標準曲(qu)線的(de)(de)差(cha)(cha)(cha)異，須檢(jian)驗(yan)殘(can)差(cha)(cha)(cha)，截(jie)距(ju)和(he)(he)斜(xie)率(lv)三項(xiang)(xiang)，分(fen)(fen)別有(you)不(bu)(bu)同的(de)(de)統計學參(can)數(shu)，殘(can)差(cha)(cha)(cha)用(yong)F檢(jian)驗(yan)，截(jie)距(ju)和(he)(he)斜(xie)率(lv)采用(yong)較為(wei)(wei)(wei)(wei)復雜(za)的(de)(de)統計量(liang)(liang)。2、從實際操作(zuo)講：多(duo)用(yong)協方差(cha)(cha)(cha)分(fen)(fen)析檢(jian)驗(yan)截(jie)距(ju)和(he)(he)斜(xie)率(lv)的(de)(de)差(cha)(cha)(cha)異，以(yi)SPSS為(wei)(wei)(wei)(wei)例：1.先重新整理數(shu)據(ju),將y2數(shu)據(ju)列加到y1下(xia)面,變(bian)(bian)成一(yi)(yi)個(ge)(ge)變(bian)(bian)量(liang)(liang)y;將x2數(shu)據(ju)列加到x1下(xia)面,變(bian)(bian)成一(yi)(yi)個(ge)(ge)變(bian)(bian)量(liang)(liang)x;然后(hou)再設(she)定一(yi)(yi)個(ge)(ge)新的(de)(de)分(fen)(fen)組(zu)變(bian)(bian)量(liang)(liang)group,原來第1組(zu)值為(wei)(wei)(wei)(wei)1,第2組(zu)值為(wei)(wei)(wei)(wei)2. 2.進行協方差(cha)(cha)(cha)分(fen)(fen)析(第一(yi)(yi)步分(fen)(fen)析斜(xie)率(lv)是(shi)否(fou)無差(cha)(cha)(cha)異).Analyze->GeneralLinear Model->Univariate Dependent List:填(tian)(tian)入(ru)y---------將y做(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)因(yin)變(bian)(bian)量(liang)(liang) Fixed Factor:填(tian)(tian)入(ru)group Covaraites:填(tian)(tian)入(ru)x--------將x做(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)協變(bian)(bian)量(liang)(liang) Model:選Custom Model:填(tian)(tian)入(ru) x groupx*group---------注(zhu)意(yi)如(ru)果(guo)(guo)變(bian)(bian)量(liang)(liang)填(tian)(tian)入(ru)順序不(bu)(bu)一(yi)(yi)樣(yang),結(jie)(jie)果(guo)(guo)也(ye)會(hui)不(bu)(bu)一(yi)(yi)樣(yang). Sum ofsquares下(xia)拉(la)列表(biao)框:選TypeI 然后(hou)點(dian)擊ok,看(kan)結(jie)(jie)果(guo)(guo)里x*group這一(yi)(yi)行的(de)(de)Sig.P值,若(ruo)大(da)于0.05,則(ze)接受原假設(she),即兩(liang)(liang)(liang)條回歸直(zhi)(zhi)線的(de)(de)斜(xie)率(lv)無差(cha)(cha)(cha)異,否(fou)則(ze)拒絕. 3.再來進行截(jie)距(ju)的(de)(de)無差(cha)(cha)(cha)異分(fen)(fen)析其實過程(cheng)跟(gen)上面一(yi)(yi)樣(yang),只是(shi)Model里去掉了x*group交(jiao)叉(cha)項(xiang)(xiang).Analyze->GeneralLinear Model->Univariate Dependent List:填(tian)(tian)入(ru)y---------將y做(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)因(yin)變(bian)(bian)量(liang)(liang) Fixed Factor:填(tian)(tian)入(ru)group Covaraites:填(tian)(tian)入(ru)x--------將x做(zuo)為(wei)(wei)(wei)(wei)協變(bian)(bian)量(liang)(liang) Model:選Custom Model:填(tian)(tian)入(ru) x group ---------注(zhu)意(yi)如(ru)果(guo)(guo)變(bian)(bian)量(liang)(liang)填(tian)(tian)入(ru)順序不(bu)(bu)一(yi)(yi)樣(yang),結(jie)(jie)果(guo)(guo)也(ye)會(hui)不(bu)(bu)一(yi)(yi)樣(yang). Sum of squares下(xia)拉(la)列表(biao)框:選TypeI 點(dian)擊ok后(hou),看(kan)group一(yi)(yi)行的(de)(de)Sig.P值,若(ruo)P值大(da)于0.05說(shuo)明兩(liang)(liang)(liang)條回歸直(zhi)(zhi)線截(jie)距(ju)也(ye)無差(cha)(cha)(cha)異,若(ruo)小于0.05說(shuo)明截(jie)距(ju)是(shi)有(you)差(cha)(cha)(cha)異的(de)(de)。

　　6.標準(zhun)系列的標準(zhun)溶液體積取用中有(you)效(xiao)數字該如(ru)何寫呢?

　　標準(zhun)(zhun)溶液體(ti)積(ji)取(qu)用(yong)的(de)有效數字跟你采(cai)用(yong)的(de)體(ti)積(ji)量(liang)(liang)(liang)具有直接關系(xi)。比如說量(liang)(liang)(liang)取(qu)或(huo)準(zhun)(zhun)確(que)量(liang)(liang)(liang)取(qu)等字眼(yan)，10mL和10.0mL提示你要采(cai)用(yong)不同(tong)的(de)量(liang)(liang)(liang)具。當我們(men)使用(yong)某個量(liang)(liang)(liang)具完(wan)成某次體(ti)積(ji)取(qu)用(yong)后，讀數是(shi)按照量(liang)(liang)(liang)具的(de)最小(xiao)允(yun)差(cha)決定(ding)的(de)，而(er)最小(xiao)允(yun)差(cha)是(shi)針對最小(xiao)分(fen)(fen)度(du)線而(er)言的(de)。當取(qu)用(yong)10mL體(ti)積(ji)時(shi)(shi)，如果用(yong)A級10mL的(de)分(fen)(fen)度(du)吸管(guan)，那么(me)10.0mL應該(gai)是(shi)確(que)定(ding)的(de)，因(yin)為(wei)(wei)(wei)(wei)它(ta)的(de)分(fen)(fen)度(du)線為(wei)(wei)(wei)(wei)0.1mL。當取(qu)用(yong)1mL體(ti)積(ji)時(shi)(shi)，如果用(yong)A級1mL的(de)分(fen)(fen)度(du)吸管(guan)，那么(me)1.00mL應該(gai)是(shi)確(que)定(ding)的(de)，因(yin)為(wei)(wei)(wei)(wei)它(ta)的(de)分(fen)(fen)度(du)線為(wei)(wei)(wei)(wei)0.01mL。所以我個人意見(jian)，到(dao)底寫10.00還(huan)是(shi)10.0以最小(xiao)分(fen)(fen)度(du)線來確(que)定(ding)，最小(xiao)分(fen)(fen)度(du)線以下的(de)都為(wei)(wei)(wei)(wei)估(gu)讀。如果你認為(wei)(wei)(wei)(wei)估(gu)讀也是(shi)有效數字的(de)話，10.00mL也可以，因(yin)為(wei)(wei)(wei)(wei)此時(shi)(shi)的(de)容量(liang)(liang)(liang)允(yun)差(cha)為(wei)(wei)(wei)(wei)0.05mL，但1.000mL就沒有太大意義了，因(yin)為(wei)(wei)(wei)(wei)A級1mL的(de)分(fen)(fen)度(du)吸管(guan)的(de)容量(liang)(liang)(liang)允(yun)差(cha)已經(jing)是(shi)0.008mL了。

　　7.標準曲線的(de)相關系(xi)數的(de)有效數字該如何保留呢?

　　GB5750.3-20068.2.7項有如下規定：校準曲(qu)線相關系數(shu)(shu)只(zhi)舍不入，保留到小數(shu)(shu)點(dian)后(hou)出(chu)現(xian)非9的一位，如0.99989→0.9998。如果小數(shu)(shu)點(dian)后(hou)都是9時，最多保留小數(shu)(shu)點(dian)后(hou)4位。

　　8.標準曲線可(ke)以用(yong)同一濃度不(bu)同體積的進樣(yang)來做嗎?

　　標(biao)準(zhun)(zhun)系(xi)(xi)列一(yi)般都是(shi)(shi)配制不(bu)(bu)同(tong)濃(nong)(nong)度(du)，進(jin)樣(yang)(yang)相同(tong)體(ti)(ti)(ti)積(ji)來(lai)做(zuo)(zuo)的(de)(de)(de)(de)(濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa))。但實際工作中我們還用到同(tong)一(yi)濃(nong)(nong)度(du)來(lai)進(jin)樣(yang)(yang)不(bu)(bu)同(tong)體(ti)(ti)(ti)積(ji)的(de)(de)(de)(de)方式(shi)來(lai)做(zuo)(zuo)(體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa))，濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)與體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa)的(de)(de)(de)(de)區別在(zai)(zai)于濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)中與待(dai)測物(wu)質(zhi)(zhi)存在(zai)(zai)的(de)(de)(de)(de)溶(rong)劑(ji)/待(dai)測物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)比例與體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa)不(bu)(bu)同(tong)。濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)中溶(rong)劑(ji)的(de)(de)(de)(de)環境(體(ti)(ti)(ti)積(ji))基(ji)本是(shi)(shi)一(yi)致(zhi)的(de)(de)(de)(de)，這(zhe)樣(yang)(yang)的(de)(de)(de)(de)好處就是(shi)(shi)濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)在(zai)(zai)判(pan)斷溶(rong)劑(ji)(或溶(rong)劑(ji)中干擾(rao)物(wu)質(zhi)(zhi))和(he)待(dai)測物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)指認(ren)上(shang)更(geng)加(jia)容(rong)易。體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa)中干擾(rao)物(wu)質(zhi)(zhi)也會隨標(biao)準(zhun)(zhun)系(xi)(xi)列增加(jia)，不(bu)(bu)容(rong)易實現待(dai)測物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)指認(ren)。從進(jin)樣(yang)(yang)針，進(jin)小體(ti)(ti)(ti)積(ji)時(shi)不(bu)(bu)確(que)定(ding)度(du)比較大，帶(dai)來(lai)的(de)(de)(de)(de)直接結果時(shi)標(biao)準(zhun)(zhun)曲線不(bu)(bu)如濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)容(rong)易做(zuo)(zuo)直。而且物(wu)理體(ti)(ti)(ti)積(ji)的(de)(de)(de)(de)限制，體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa)不(bu)(bu)太容(rong)易實現較大跨度(du)的(de)(de)(de)(de)濃(nong)(nong)度(du)系(xi)(xi)列設置。總之，體(ti)(ti)(ti)積(ji)法(fa)(fa)(fa)和(he)濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)本質(zhi)(zhi)上(shang)是(shi)(shi)一(yi)致(zhi)的(de)(de)(de)(de)，但濃(nong)(nong)度(du)法(fa)(fa)(fa)有：容(rong)易做(zuo)(zuo)好標(biao)準(zhun)(zhun)曲線，容(rong)易實現較大濃(nong)(nong)度(du)跨度(du)和(he)容(rong)易實現待(dai)測物(wu)質(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)指認(ren)等優(you)點。

　　9.標準曲線(xian)查出樣品是負值，如何(he)報告結(jie)果(guo)呢(ni)?

　　這(zhe)種情況(kuang)下我們(men)一般(ban)選擇(ze)四種方(fang)(fang)式(shi)報告結果：未檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)，<檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)，<定量限(xian)，<標準曲線(xian)第一點所推算(suan)的(de)(de)樣品(pin)濃(nong)度。四種都(dou)有(you)(you)道理，實際區別是(shi)埋在(zai)四種選擇(ze)下面的(de)(de)結果報告人的(de)(de)風(feng)險。未檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)的(de)(de)全部含義(yi)應該(gai)是(shi)本實驗(yan)室本儀器本方(fang)(fang)法(fa)未檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)，如(ru)果沒有(you)(you)這(zhe)些界(jie)定，未檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)的(de)(de)歧義(yi)很多，而(er)且沒有(you)(you)提供其它(ta)任何可用的(de)(de)信息。所以我建議(yi)學生一般(ban)不采用這(zhe)種報告方(fang)(fang)法(fa);檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)是(shi)定性(xing)檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)的(de)(de)標志，它(ta)是(shi)跟空白的(de)(de)統計(ji)比較(jiao)計(ji)算(suan)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)來的(de)(de)。每(mei)臺儀器，每(mei)次(ci)測(ce)定都(dou)有(you)(you)其檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)，檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)計(ji)算(suan)目前有(you)(you)兩大(da)類計(ji)算(suan)方(fang)(fang)法(fa)：單濃(nong)度方(fang)(fang)法(fa)和校正設(she)計(ji)法(fa)(Anal.Chem.1997,69:3069)，常規采用的(de)(de)單濃(nong)度方(fang)(fang)法(fa)需要額(e)外的(de)(de)工作，所以現在(zai)趨(qu)向用校正設(she)計(ji)法(fa)，既(ji)利用標準曲線(xian)直接計(ji)算(suan)檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)，但檢(jian)(jian)出(chu)(chu)(chu)(chu)(chu)限(xian)I類和II類錯誤(wu)皆控制在(zai)0.05。

　　定(ding)量(liang)(liang)限(xian)是(shi)可(ke)以定(ding)量(liang)(liang)檢(jian)(jian)出的(de)(de)(de)標(biao)志，其(qi)RSD定(ding)為10%，其(qi)II類(lei)錯(cuo)誤比(bi)檢(jian)(jian)出限(xian)小很多。<標(biao)準(zhun)曲(qu)線第一(yi)(yi)點所推算的(de)(de)(de)樣(yang)品濃(nong)度(du)(du)，是(shi)我們儀器比(bi)較可(ke)信的(de)(de)(de)測(ce)(ce)(ce)定(ding)濃(nong)度(du)(du)。總之，報告<檢(jian)(jian)出限(xian)，<定(ding)量(liang)(liang)限(xian)，<標(biao)準(zhun)曲(qu)線第一(yi)(yi)點所推算的(de)(de)(de)樣(yang)品濃(nong)度(du)(du)所犯(fan)I類(lei)和II類(lei)錯(cuo)誤依次(ci)降(jiang)低，但(dan)如果這個報告結果已(yi)經超過(guo)你(ni)要(yao)判斷的(de)(de)(de)限(xian)值，那么你(ni)的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)就一(yi)(yi)點意義(yi)都沒有(you)了(le)。所以現在的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)單位甚(shen)至直接報告小于國家標(biao)準(zhun)規定(ding)的(de)(de)(de)限(xian)值，從概率統計的(de)(de)(de)角度(du)(du)講，它犯(fan)錯(cuo)誤的(de)(de)(de)幾率最小，但(dan)又(you)解決(jue)了(le)客(ke)戶的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)(ce)問題。

　　10.空(kong)白測(ce)出(chu)來是(shi)負值，該(gai)不該(gai)減呢(ni)?

　　空白代表你所(suo)(suo)選擇的空白對儀器響應/信號的影響，當(dang)然可能(neng)是(shi)正方向(xiang)(xiang)和負方向(xiang)(xiang)的影響，所(suo)(suo)以理論上講(jiang)必(bi)須減掉空白。至于是(shi)先減空白信號，還是(shi)減空白測定值，按(an)國(guo)家規定或參見4問(wen)題。

　　11.線性范(fan)圍(wei)(動(dong)態范(fan)圍(wei))的最低點和最高點如何確定呢?

　　配置一系列(lie)濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)標(biao)準，包(bao)括0濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)，從低濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)開始(shi)擬(ni)合當擬(ni)合檢驗出現P>0.05的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)高的(de)(de)(de)(de)(de)(de)那個濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)點(dian)為止。有(you)也(ye)經驗說當加(jia)入的(de)(de)(de)(de)(de)(de)高濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)點(dian)在低濃(nong)(nong)(nong)(nong)度(du)點(dian)構建的(de)(de)(de)(de)(de)(de)直(zhi)線(xian)方程推算的(de)(de)(de)(de)(de)(de)響(xiang)應(ying)超出±10%范(fan)圍(wei)。關(guan)于(yu)線(xian)性(xing)(xing)范(fan)圍(wei)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)最(zui)(zui)低點(dian)應(ying)該是(shi)0、檢出限或是(shi)定(ding)量限的(de)(de)(de)(de)(de)(de)問題，個人趨(qu)向最(zui)(zui)低點(dian)為0，因為線(xian)性(xing)(xing)范(fan)圍(wei)只是(shi)統計學上線(xian)性(xing)(xing)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)表現，跟能否準確定(ding)量是(shi)兩(liang)方面的(de)(de)(de)(de)(de)(de)問題。