1.在重蒸(zheng)酚(fen)中為什么加入0.1%的(de)8-羥基喹啉及少(shao)量巰基乙醇?

　　保存在(zai)冰箱中的(de)酚(fen)，容易(yi)被空氣氧化而變成(cheng)粉紅色，這(zhe)樣的(de)酚(fen)容易(yi)降(jiang)解DNA，一般不可以(yi)使(shi)用。為了防止酚(fen)的(de)氧化，可加入0.1%的(de)8-羥基(ji)(ji)喹啉(lin)(lin)及少量巰基(ji)(ji)乙醇。8-羥基(ji)(ji)喹啉(lin)(lin)是帶有淡黃色的(de)固體粉沫，不僅(jin)能(neng)抗氧化，并在(zai)一定程度(du)上能(neng)抑制DNase的(de)活(huo)性。

　　2.如何將不同(tong)構型的質粒DNA區別(bie)開(kai)?

　　由于不(bu)同構型的(de)DNA在瓊脂糖凝膠(jiao)電(dian)泳(yong)中的(de)遷移(yi)率不(bu)同，cccDNA的(de)泳(yong)動(dong)速(su)度最快(kuai)，通過凝膠(jiao)電(dian)泳(yong)方法(fa)可將不(bu)同構型的(de)DNA區別開。

　　3.用酚-氯仿抽提細胞基因組DNA時，通常要(yao)在酚-氯仿中加少(shao)許異(yi)戊醇，為什(shen)么?

 　　異戊(wu)醇可以(yi)降低(di)表面(mian)張力，從而減少氣泡產生。另外，異戊(wu)醇有(you)助于分(fen)相，使離心后的上層(ceng)含DNA的水相、中間(jian)的變性(xing)蛋白相及下層(ceng)有(you)機(ji)溶劑相維持(chi)穩定。

　　4.用(yong)乙(yi)醇沉淀(dian)DNA時(shi)，為什么加(jia)入單價的陽離子?

　　用乙醇沉淀(dian)DNA時，通常要在(zai)溶液中(zhong)加入(ru)單價(jia)的(de)陽離子，如NaCl或NaAc，Na+中(zhong)和DNA分子上的(de)負電(dian)荷(he)(he)，減少DNA分子之間(jian)的(de)同(tong)性電(dian)荷(he)(he)相斥力，而易于(yu)聚集沉淀(dian)。

　　5.在提(ti)取RNA時經常使用異硫氰酸胍，有什么作用?

　　RNA是一(yi)種極易降(jiang)(jiang)解(jie)的核酸分(fen)子。高濃(nong)度強(qiang)變性劑(ji)異硫(liu)氰(qing)酸胍使(shi)細胞結構(gou)迅(xun)速被(bei)破(po)壞，使(shi)RNA從細胞中釋放(fang)出來(lai)。同(tong)時(shi)高濃(nong)度異硫(liu)氰(qing)酸胍還(huan)使(shi)細胞內的RNA酶失活，使(shi)釋放(fang)出的RNA不被(bei)降(jiang)(jiang)解(jie)。

　　6.蛋白(bai)印跡(ji)中封閉液的作(zuo)用?

　　封(feng)閉(bi)液的(de)作用是(shi)封(feng)閉(bi)未吸附蛋白的(de)部位，以減(jian)少非特異性結合背景(jing)的(de)影響。常用的(de)封(feng)閉(bi)液有脫脂奶粉、小牛血清等。

　　7.DNA通常保存在什么緩沖液中?

　　采用TE緩沖(chong)液，Tris-HCl的(de)緩沖(chong)系統，加入EDTA可以螯合二價(jia)金屬(shu)離(li)子(zi)進而抑制依(yi)賴(lai)于二價(jia)金屬(shu)離(li)子(zi)的(de)DNA酶的(de)活性，對(dui)DNA起到保護作用。

　　8.在酶切反應緩(huan)沖液中為什么加(jia)入BSA?

　　通過提(ti)高溶液中(zhong)蛋(dan)白質的濃度，對酶起保護作(zuo)用。

　　9.簡單的(de)克(ke)隆(long)載體必需包括什么?

　　復制起點(dian);選擇標記：主(zhu)要是(shi)抗性基(ji)因(yin);多克隆位點(dian)：便于外源DNA的(de)插入。

　　10.用酚抽提(ti)細胞DNA時，有什么(me)作用?

　　使蛋白質(zhi)變性。

　　11.在分(fen)離DNA時，要使(shi)用EDTA，為什么?

　　EDTA是金(jin)屬(shu)離子(zi)螯(ao)合劑，螯(ao)合二價離子(zi)，抑制核酸(suan)酶(mei)的活性(xing)。

　　12.在分(fen)離(li)DNA過程中，造成DNA分(fen)子(zi)斷裂的因素有哪些?

　　核酸(suan)酶(mei)降(jiang)(jiang)解(jie);化學降(jiang)(jiang)解(jie);物理剪切。

　　13.使用離心(xin)機應注意什么(me)?

　　首(shou)先(xian)應(ying)該根(gen)據自己的(de)實驗(yan)需求選擇(ze)合適的(de)離(li)心機(ji)(ji)和轉(zhuan)子以及離(li)心管(guan)，使用(yong)離(li)心機(ji)(ji)時的(de)工作轉(zhuan)速(su)不(bu)應(ying)該超過離(li)心機(ji)(ji)、轉(zhuan)子以及離(li)心管(guan)的(de)最大允許轉(zhuan)速(su)。離(li)心前(qian)注意嚴格(ge)平(ping)衡樣(yang)品。安(an)裝轉(zhuan)子和轉(zhuan)子蓋要(yao)規(gui)范、準(zhun)確。離(li)心時要(yao)留人看(kan)守(shou)，發現離(li)心機(ji)(ji)異常應(ying)立即(ji)關閉離(li)心機(ji)(ji)。離(li)心結束(shu)后要(yao)安(an)放好轉(zhuan)子。

　　14.分子生物(wu)學(xue)實驗室(shi)常(chang)用(yong)的(de)滅菌方法有哪些?

　　高壓蒸汽滅(mie)菌(jun)、干熱滅(mie)菌(jun)、化學藥劑消毒(du)、過濾除菌(jun)。

　　15.使(shi)用移液器(qi)有(you)哪些注意事項?

　　垂直吸液(ye)(ye)、慢(man)吸慢(man)放;選擇合適的量程范圍，不能超過量程使用;選擇與移液(ye)(ye)器匹(pi)配的槍頭，安裝槍頭時(shi)不要用力太猛;移液(ye)(ye)器每日(ri)用完后，應旋到最大刻度。