液相色譜儀是藥物分(fen)析工作者最(zui)常用(yong)的(de)“一門(men)武器(qi)”。從(cong)業者深感(gan)何(he)時能(neng)(neng)將(jiang)液相做到(dao)有“打dota”感(gan)覺時，便是到(dao)了游刃有余(yu)、駕輕就(jiu)熟的(de)境(jing)界。現(xian)今的(de)液相軟件均已具(ju)備了強大的(de)數據處(chu)理功(gong)能(neng)(neng)，如能(neng)(neng)庖丁解牛般(ban)使(shi)用(yong)，便可將(jiang)此測定做到(dao)事半(ban)功(gong)倍、輕松自如。

　　一(yi)、 水相(xiang)中的溶(rong)質溶(rong)解方式

　　水相中需溶(rong)(rong)解的無機鹽(yan)和(he)表面活性劑(ji)等固體(ti)溶(rong)(rong)質(zhi)，強烈建議采(cai)用加(jia)熱法，不(bu)建議采(cai)用振搖、超聲(sheng)等方式。因此種方式的溶(rong)(rong)解，溶(rong)(rong)質(zhi)可能處于“臨界膠團濃度(du)”，其后一(yi)旦遇(yu)到某特殊情形(xing)(如遇(yu)有機溶(rong)(rong)劑(ji)、溫(wen)度(du)劇降等)，極易析出少量結晶;而一(yi)旦析出，便將損傷儀器和(he)色(se)譜柱(zhu)，呈現泵頭處析出“鹽(yan)和(he)白粉(fen)”的現象。

　　二(er)、 流動相的配制與(yu)使用

　　1. 恒度洗脫

　　一定(ding)是將水相(xiang)與(yu)有(you)(you)機相(xiang)混合(he)后、抽濾(使(shi)(shi)用混合(he)型過(guo)濾膜(mo))，用一個(ge)管(guan)路(如(ru)A管(guan))泵入儀(yi)(yi)器，這是使(shi)(shi)用的(de)一個(ge)原則性(xing)問題(ti)!切(qie)勿(wu)因(yin)節約有(you)(you)機相(xiang)、便于摸索色譜條件(jian)等原因(yin)而使(shi)(shi)用兩個(ge)管(guan)路(一個(ge)純(chun)水相(xiang)、一個(ge)純(chun)有(you)(you)機相(xiang))抽入儀(yi)(yi)器，即便配制(zhi)了(le)脫氣機。因(yin)此種(zhong)情形極(ji)易造(zao)成水相(xiang)中的(de)鹽和表面活性(xing)劑少(shao)量析(xi)出。

　　剩余流動相完全可(ke)繼續使用(yong)，密封后(hou)放置陰涼處(chu);待下次(ci)試驗時與新配(pei)制的流動相混合(he)后(hou)抽(chou)濾(lv)即可(ke)。無需擔心發(fa)霉、無機(ji)鹽析出、揮發(fa)、比例(li)不準(zhun)等問(wen)題，這些(xie)皆為疑(yi)(yi)神疑(yi)(yi)鬼。實踐是檢驗真理的唯一標準(zhun)!實踐吧(ba)~

　　2. 梯度(du)洗(xi)脫

　　流動(dong)相(xiang)(xiang)配(pei)制最(zui)為(wei)(wei)科學(xue)的(de)(de)方式是(shi)：A相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)高(gao)比(bi)例(li)的(de)(de)水(shui)(shui)相(xiang)(xiang)-低比(bi)例(li)的(de)(de)有(you)機(ji)相(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)低比(bi)例(li)的(de)(de)水(shui)(shui)相(xiang)(xiang)-高(gao)比(bi)例(li)的(de)(de)有(you)機(ji)相(xiang)(xiang)(英國藥(yao)典幾乎(hu)均(jun)如(ru)此);其次為(wei)(wei)：A相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)高(gao)比(bi)例(li)的(de)(de)水(shui)(shui)相(xiang)(xiang)-低比(bi)例(li)的(de)(de)有(you)機(ji)相(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)有(you)機(ji)相(xiang)(xiang);最(zui)不科學(xue)的(de)(de)為(wei)(wei)：A相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)水(shui)(shui)相(xiang)(xiang)、B相(xiang)(xiang)為(wei)(wei)純(chun)有(you)機(ji)相(xiang)(xiang)，如(ru)既(ji)有(you)質量標準采用了此種方式，強烈(lie)建(jian)議改為(wei)(wei)第(di)二種或第(di)一種方式，否則基線漂移嚴(yan)重，難以進行穩定(ding)的(de)(de)雜質檢測。

　　梯度洗脫結束后，強烈建議經(jing)5分鐘(zhong)回到初(chu)始(shi)(shi)狀態(tai)，再平衡5分鐘(zhong)后開始(shi)(shi)下一(yi)針(zhen)測定(ding)。這10分鐘(zhong)的(de)穩(wen)定(ding)極為關鍵(jian)。切(qie)勿短時間內(nei)回到初(chu)始(shi)(shi)狀態(tai)，此(ci)舉對儀器損傷較(jiao)大。

　　三、 色(se)譜柱的(de)安裝

　　標準SOP應為：取A管路放入流(liu)動相(xiang)(xiang)瓶中→擰松(song)泵頭→流(liu)速(su)由0ml/min逐級(ji)升至10ml/min，觀察尾(wei)液是否呈(cheng)瀑(pu)布狀(zhuang)流(liu)出，持續10秒(miao)→擰緊泵頭→流(liu)動相(xiang)(xiang)呈(cheng)拋(pao)射狀(zhuang)從安裝(zhuang)色譜(pu)柱的一(yi)端噴出，觀測(ce)是否呈(cheng)拋(pao)物線狀(zhuang)，持續5秒(miao)→流(liu)速(su)逐級(ji)降至1.0ml/min →安裝(zhuang)色譜(pu)柱，待20秒(miao)后，流(liu)動相(xiang)(xiang)從色譜(pu)柱另一(yi)端呈(cheng)泉水狀(zhuang)涌出，安裝(zhuang)另一(yi)頭→手握兩端，擰緊。

　　以上(shang)安裝(zhuang)順序(xu)遵循的(de)是：逐(zhu)級(ji)排(pai)放氣泡和儀器(qi)內(nei)存留的(de)洗液，使得(de)安裝(zhuang)后氣泡極難混入(ru)。本人曾試驗梯度洗脫(tuo)連(lian)續一周，第一針與最后一針主成分(fen)保留時間(jian)相差在6秒以內(nei)。

　　四、 試驗(yan)后色譜柱的(de)清洗

　　1. 最為常用(yong)的C8柱(zhu)、C18柱(zhu)

　　1.1 流(liu)動相僅為乙腈(jing)-水或(huo)甲醇-水時

　　繼(ji)續(xu)沖洗30分鐘，流速(su)1.0ml/min，柱(zhu)溫保(bao)持試驗時溫度，即可。

　　1.2 水相中有無機鹽、表面活性劑或三乙(yi)胺(an)、高氯(lv)酸等(deng)物質時

　　先采用純水(或(huo)含有2%甲(jia)醇(chun))，沖洗A管路(試驗采用哪個(ge)管路，就要從(cong)頭到尾沖洗該管路)，時(shi)間30分鐘(如流動(dong)相(xiang)中有表面活性劑，適(shi)當增(zeng)加時(shi)間)，流速1.0ml/min，柱(zhu)溫(wen)可較試驗溫(wen)度(du)高出5~10℃;隨后更換成20%甲(jia)醇(chun)再沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱(zhu)溫(wen)箱加熱(re)裝置關閉。結束后取下(xia)色譜柱(zhu)放置陰(yin)涼(liang)處(chu)。

　　很(hen)多同仁其后(hou)采(cai)用(yong)高比例(li)的甲醇(chun)沖洗，實屬畫蛇添足，導致殘余的有機相(xiang)中(zhong)水(shui)相(xiang)遇到高比例(li)的甲醇(chun)后(hou)析出少量(liang)鹽(yan)和表(biao)面活(huo)性劑，從(cong)而在(zai)泵頭上、色譜柱中(zhong)析出，也導致了色譜柱壽(shou)命大為縮短。本人(ren)曾使(shi)用(yong)過一(yi)根(gen)約(yue)2000元的色譜柱，正(zheng)著用(yong)了四年、倒著用(yong)了兩(liang)年(倒著用(yong)測非有關物質(zhi))。

　　2. 其他(ta)類型色譜柱

　　查詢獲取如何科學合理地(di)使用與清洗保存該(gai)類型色譜柱的方法，切勿盲動，否則導致色譜柱性(xing)能急(ji)劇下降。

　　五、 試驗順序

　　工作流程應如下進行：

　　(1) 0~2小(xiao)時 配制流動相、對照品和供試品溶液(ye)等，切勿(wu)催(cui)促昨日試驗同(tong)事。

　　(2) 2~3小時 采用(yong)A管路注入流(liu)動相(B、C、D管路從來不用(yong)，除非梯度洗脫才用(yong)到B管路)，平衡(heng)1小時。如流(liu)動相中有表面活性劑，建議前一晚小流(liu)速(su)過(guo)夜，第二天(tian)上(shang)班后將流(liu)速(su)增至(zhi)1.0ml/min，平衡(heng)1小時后即(ji)可(ke)開始做試驗。

　　(3) 3~5小(xiao)時 測定空白(bai)溶劑，一(yi)定要做到基線(xian)不漂移(yi)后(hou)方(fang)可(ke)開始測定。所謂(wei)“不漂移(yi)”，通常系指以(yi)1.0%自身對照溶液主成分峰(feng)高約20%高度(du)來設(she)定的視野范圍觀察所得(de)(de)，切(qie)不可(ke)設(she)定得(de)(de)過小(xiao)，使得(de)(de)雜質峰(feng)顯得(de)(de)很(hen)突兀、基線(xian)抖動(dong)得(de)(de)很(hen)厲害，弄得(de)(de)人很(hen)擔心。

　　(4) 5~8小時(shi) 配制完(wan)所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，預試了對照溶液(ye)和供試品(pin)溶液(ye)，設(she)定(ding)好自(zi)動(dong)進(jin)樣(yang)程序(xu)，程序(xu)最后一針設(she)定(ding)為小流速過夜，紫(zi)外燈關閉。切勿(wu)設(she)定(ding)為切換(huan)成B管路洗脫，此舉得不(bu)償失!

　　(5) 8~24小時 放(fang)心回(hui)家(jia)，讓儀器(qi)自動進(jin)樣，除(chu)非不穩定的樣品(pin)(配(pei)制一(yi)份測定一(yi)針)。充(chong)分利(li)用(yong)下班后的16小時，做(zuo)到從容(rong)不迫、鎮定自若(ruo)。如單位還無自動進(jin)樣裝(zhuang)置(zhi)，強(qiang)烈建議向領導申請(qing)購買，因一(yi)臺(tai)自動媲美三(san)臺(tai)手動。

　　(6) 第二天(tian)0~0.5小時 檢查并計算昨晚試驗結(jie)果，如(ru)發現不良(liang)記錄，將流(liu)速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測定(ding)重(zhong)新配制的該份樣(yang)品即可(同時回(hui)校對照(zhao)一針)。無(wu)需全部重(zhong)新測定(ding)，不要過度謹小慎(shen)微。

　　(7) 第二天0.5~2.0小(xiao)時 如上(shang)沖洗(xi)色譜(pu)柱，交給其后試驗同事(shi)。

　　六、 液(ye)相軟件的使用

　　現今幾大主(zhu)(zhu)流品牌(pai)的硬件(jian)性能(neng)已(yi)相差無幾，主(zhu)(zhu)要還是軟件(jian)的設計是否能(neng)使操作(zuo)者(zhe)得心應(ying)手、隨心所欲。

　　強烈建(jian)議掌(zhang)握各軟件(jian)的(de)批處(chu)理、編輯樣品(pin)處(chu)理模板(ban)等功(gong)能，做到(dao)一勞永(yong)逸，讓(rang)軟件(jian)充分(fen)為工作所用(yong)。“磨刀不誤(wu)砍柴工”：本(ben)人(ren)曾用(yong)20分(fen)鐘完(wan)成500個溶出(chu)度樣品(pin)數據處(chu)理，做出(chu)溶出(chu)曲線(xian)圖。體會一下(xia)~

　　七、 其他(ta)

　　1. 如(ru)需(xu)使(shi)用(yong)正(zheng)相(xiang)系(xi)統，一定要單獨采(cai)用(yong)一臺儀(yi)器(如(ru)二手(shou)的、較為(wei)破舊的、淘汰的等(deng))，切勿采(cai)用(yong)異丙醇轉換，此(ci)舉對儀(yi)器損(sun)傷(shang)極大，等(deng)于(yu)“自殺”!

　　2. 正(zheng)相所(suo)使用的流動(dong)相(如正(zheng)己烷(wan)、環己烷(wan)等)，無需抽(chou)濾(lv)，混勻(yun)超聲后(hou)即(ji)可使用，“大道至簡”。

　　3. 柱溫(wen)箱(xiang)(xiang)必須配(pei)制。如欲(yu)經濟，可購買國產柱溫(wen)箱(xiang)(xiang)。