衛(wèi)生部：2015全國胎兒無創(chuàng)產(chǎn)前檢測實驗室室間質(zhì)評申請開始

2014-12-23 作者：瀏覽數(shù)：1808

　　2014年12月15日，衛(wèi)生部臨床檢驗中心發(fā)布2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知，表示將于2015年度正式開展全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價。

　　室間質(zhì)量評價也稱為能力驗證實驗(以下簡稱PT)，是指多家實驗室分析同一標本并由外部獨立機構收集、反饋實驗室上報結果并評價實驗室操作的活動，通過實驗室間的比對判定實驗室的校準、檢測能力以及監(jiān)控其持續(xù)能力。長期以來，PT一直是臨床實驗室和公共衛(wèi)生實驗室質(zhì)量保證的一個重要組成部分。

　　室間質(zhì)評目的：提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測的質(zhì)量

　　衛(wèi)生部對全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測展開室間質(zhì)量評價，主要目的是提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測的質(zhì)量。通知原文如下：

　　“新一代高通量測序技術發(fā)展迅速，并已由實驗室研究進入到臨床檢測應用，如外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)檢測、胚胎植入前遺傳學診斷(PGD和胚胎植入前遺傳學篩查(PGS)等，其中外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)檢測目前已有國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)批準的儀器和試劑。為提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測的質(zhì)量，衛(wèi)生部臨床檢驗中心于2015年度正式開展全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價。”

　　2014室間質(zhì)評結果：絕大多數(shù)結果符合預期

　　這并不是衛(wèi)生部第一次發(fā)布全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知，2014年11月，為配合衛(wèi)計委新一代高通量測序技術應用試點工作，衛(wèi)生部臨床檢驗中心開展了該項目的全國室間質(zhì)量評價活動，并要求各臨床實驗室使用日常所用試劑和程序進行檢測。以下是2014室間質(zhì)評主要結果，數(shù)據(jù)來源于《全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18 和 T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價調(diào)查活動結果報告》。

　　1、樣本情況

　　本次共發(fā)放 20 個質(zhì)評樣本，編號分別為 1401、1402、1403、1404、1405、1406、1407、1408、1409、1410、1411、1412、1413、1414、1415、1416、1417、1418、1419、1420。樣本為人血漿，樣本量為 700µl。其中 15 份樣本用于本次PT 成績評價，5 份樣本用于正式質(zhì)評發(fā)放樣本類型的參考，不納入本次 PT 成績評價。具體信息見下表。

　　2、各檢測平臺使用的實驗室數(shù)及相關參數(shù)

　　本次質(zhì)評涉及多個檢測平臺(由于 CFDA 為檢測儀器和配套試劑共同審批，因此本小結中所提及的檢測平臺，除 LDT 外，均同時代表該平臺及相應的配套試劑)。其中有醫(yī)療器械注冊證的檢測平臺：BGISEQ-100(武漢華大基因生物醫(yī)學工程有限公司)，BGISEQ-1000(武漢華大基因生物醫(yī)學工程有限公司)，DA8600(中山大學達安基因股份有限公司)等。其他檢測平臺有：NextSeq CN500，BioelectronSeq 4000，NextSeq 500，Ion Proton，Hiseq2000， Hiseq 2500，Ion torrent PGM。需要說明的是，沒有醫(yī)療器械注冊證的試劑和儀器，均屬實驗室自用方法(laboratory developed test，LDT)，具體不同平臺的參數(shù)見下表。

　　3、實驗室回報結果情況

　　共計有 81 家實驗室回報質(zhì)評結果，4 家實驗室報告了兩個平臺的檢測結果，共計收到結果 85 份，其中有效結果 84 份(即回報結果完整、在截止日期內(nèi)回報的結果)。醫(yī)院臨床實驗室共計回報 73 份結果，獨立實驗室回報 12 份結果?？傮w來說，本次質(zhì)評絕大多數(shù)實驗室的檢測結果均符合預期結果。在 15 份 PT 評價樣本中，98.8% (83/84)的實驗室與預期結果完全相符，只有 1 家實驗室兩份陽性樣本報告了“臨界/灰區(qū)”的結果，其余結果也均與預期結果相符，具體的總體結果回報情況見下表。

　　4、各檢測平臺不同樣本的符合率情況

　　一家使用 Hiseq 2500 的實驗室報告了 1405 和 1413 號樣本(預期結果為 T13 陽性)“臨界/灰區(qū)”的結果。其他平臺所有實驗室檢測結果均與預期結果相符，無假陰性和假陽性結果。

　　5、各檢測平臺對所有樣本檢測的測序原始數(shù)據(jù)量和唯一比對 reads 數(shù)情況

　　6、PT 成績情況

　　PT 成績≥80(即 80 和 100 分)的實驗室發(fā)放質(zhì)評合格證書;PT 成績<80 分的實驗室和未回報完整定性結果的實驗室發(fā)放質(zhì)評參加證書。本次質(zhì)評中，PT成績?yōu)?100 分的實驗室 83 家，PT 成績在 80~100 分(含 80 分)的實驗室 1 家。1 家實驗室獲得質(zhì)評參加證書。

　　對開展高通量測序 NIPT 臨床檢測實驗室的啟示

　　在2014室間質(zhì)評的報告最后，衛(wèi)計委指出：雖然各臨床實驗室的檢測結果良好，但基于本檢測項目在大多數(shù)實驗室均尚未對臨床開展，因此，在將來正式開展高通量測序 NIPT 臨床檢測中，仍需謹慎對待。

　　盡管目前商業(yè)化的平臺(包括 CFDA 批準或正在進行注冊的平臺)在生物信息學分析和結果判讀方面，進行了簡化，但是與以往臨床實驗室開展的核酸檢測項目相比，基于高通量測序的 NIPT 仍然是一個相對復雜的檢測過程。通常，NIPT 的檢測流程包括：DNA 提取，文庫構建，文庫純化，文庫定量，文庫混合、測序以及結果分析的過程，完成一個批次的檢測至少需要 3~4 天，此外，在文庫構建和文庫定量中，會涉及到 PCR 擴增過程。

　　因此，如實驗室開展高通量測序 NIPT 的日常檢測，需為臨床基因擴增實驗室，具有一定的核酸檢測的基礎，選擇合適的檢測平臺，并進行性能驗證，具備經(jīng)過嚴格培訓的高素質(zhì)實驗人員，建立實驗室檢測的標準操作程序，在每批次的檢測中需使用陰性質(zhì)控和弱陽性質(zhì)控，參加室間質(zhì)量評價。

　　具體來說，在本次質(zhì)評中，部分實驗室僅有兩個不同的區(qū)域，不符合臨床基因擴增實驗室的設置要求;在選擇檢測平臺時，醫(yī)院臨床實驗室不建議采用實驗室自用方法 (LDT)，因為LDT 首先需要建立自配試劑的標準操作程序，然后還需對檢測系統(tǒng)(包括檢測儀器、試劑以及生物信息學算法)進行性能評價，給出重復性、分析敏感性、分析特異性、臨床敏感性、臨床特異性、陽性預測值以及陰性預測值等等性能指標，而目前來說，對于單個臨床實驗室，要完成 NIPT 的性能評價是非常困難的;實驗室需建立標準操作程序，并需考慮到開展大量樣本檢測后，出現(xiàn)文庫構建失敗、檢測過程操作錯誤、QC 未通過以及“灰區(qū)”樣本需復檢等情況，以及針對此情況，評價可能對檢測流程和報告時間產(chǎn)生的影響;在當前的實驗室環(huán)境條件下，儀器設備經(jīng)過一定時間的運行后，是否仍能夠保持良好的性能，能否保持原有的 QC未通過率以及檢測失敗率;此外，也不排除技術快速的發(fā)展，新的檢測平臺的出現(xiàn)，或者在原有檢測平臺上的進一步更新，導致現(xiàn)有的檢測平臺可能面臨更新或淘汰。

　　臨床實驗室需明確，基于高通量測序的 NIPT，只是一種篩查試驗，而不是診斷試驗，遺傳咨詢和進一步的檢測非常重要。并且由于檢測原理是基于外周血游離 DNA，因此具有一定的檢測局限性，例如母體嵌合、胎盤嵌合、雙胎、外周血胎兒游離 DNA 比例低等均會對結果產(chǎn)生影響。

　　總結：無創(chuàng)產(chǎn)前檢測離規(guī)范使用又近了一步

　　不管怎樣，衛(wèi)計委發(fā)布室間質(zhì)評，就已預示著這項技術成熟、臨床應用急需的檢測離規(guī)范使用又近了一步，而2014年率先通過室間質(zhì)評的技術平臺，例如上文提到的華大基因、達安基因、貝瑞和康、博奧生物等公司，無疑將在后續(xù)競爭中獲得合作終端和客戶更多的信任。(轉化醫(yī)學網(wǎng)360zhyx.com)

　　附：衛(wèi)生部臨床檢驗中心2015年全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價通知

　　衛(wèi)檢中字[2014]第04號

　　各參評單位實驗室：

　　室間質(zhì)量評價(以下簡稱“室間質(zhì)評”)是臨床實驗室保證和改進檢驗質(zhì)量的重要手段，也是醫(yī)療機構臨床實驗室行政管理和實驗室認可的基本要求。新一代高通量測序技術發(fā)展迅速，并已由實驗室研究進入到臨床檢測應用，如外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)檢測、胚胎植入前遺傳學診斷(PGD和胚胎植入前遺傳學篩查(PGS)等，其中外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)檢測目前已有國家食品藥品監(jiān)督管理總局(CFDA)批準的儀器和試劑。為提高實驗室外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測的質(zhì)量，衛(wèi)生部臨床檢驗中心于2015年度正式開展全國外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價，現(xiàn)將有關事項通知如下。

　　一、一般情況

　　 1. 臨檢中心2015年外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序檢測室間質(zhì)量評價計劃相關信息見附錄1。

　　 2. 臨檢中心室間質(zhì)評信息處理采用基于互聯(lián)網(wǎng)的室間質(zhì)評信息系統(tǒng)，室間質(zhì)評申請、檢驗結果與相關信息回報、統(tǒng)計分析圖表獲取等通過信息系統(tǒng)完成。室間質(zhì)評信息系統(tǒng)運行網(wǎng)站為檢驗醫(yī)學信息網(wǎng)(http://www.clinet.com.cn)，信息系統(tǒng)及其使用說明參見網(wǎng)站相關介紹。計劃書內(nèi)容及本通知涉及各種技術文件也可在網(wǎng)站獲取。

　　 3. 臨檢中心向參評實驗室收取室間質(zhì)評費用，用以維持室間質(zhì)評計劃運行。臨檢中心室間質(zhì)評收費依據(jù)《國家發(fā)展改革委辦公廳關于衛(wèi)生部臨床檢驗室間質(zhì)量評價等收費問題的復函》(發(fā)改辦價格[2003]1066號)。

　　二、申請

　　 1. 2015年外周血胎兒染色體非整倍體(T21、T18和T13)高通量測序室間質(zhì)量評價申請日期為自2015年1月1日至2015年1月31日，各參評實驗室應在截止日期前提出申請。

　　 2. 原參加過臨檢中心質(zhì)評的單位直接網(wǎng)上申請，用本單位用戶名和密碼登錄檢驗醫(yī)學信息網(wǎng)(http://www.clinet.com.cn)，完整填寫“衛(wèi)生部臨床檢驗中心2015年臨床檢驗室間質(zhì)量評價申請表”(一)和(二)(見附錄2);2015年新參評單位需將完整申請表(一)和(二)通過電子郵件或傳真發(fā)送臨檢中心，發(fā)送后電話聯(lián)系臨檢中心(聯(lián)系方式見本通知第四項)，以確認收到申請，同時獲取實驗室編碼及室間質(zhì)評信息系統(tǒng)登錄信息。

　　 3. 提交申請表后，按規(guī)定時間交納室間質(zhì)評費用。請將室間質(zhì)評費用統(tǒng)一匯款至：

　　戶名：衛(wèi)生部臨床檢驗中心

　　開戶銀行：中國工商銀行北京崇文門外大街支行

　　帳號：0200000509014494542

　　聯(lián) 系人：李靜

　　聯(lián)系電話：(010)5811-5052

　　請務必先申請，確認申請成功后再進行匯款。

　　三、質(zhì)控品接收、檢測及統(tǒng)計結果和質(zhì)評報告獲取有關詳細情況將在第一次質(zhì)評樣本寄出時告知。本年度質(zhì)評郵寄樣本的費用，采用到付的形式，即郵寄的費用由參評單位承擔，特此說明。

　　四、聯(lián)系方式

　　實驗室遇有室間質(zhì)評有關的任何問題，請與臨檢中心室間質(zhì)評室聯(lián)系，聯(lián)系方式如下：

　　電話：(010)5811-5055、5811-5065、6527-3025

　　傳真：(010)6527-3025