化學(xué)實驗室檢測方法的驗證與確認(rèn)的參數(shù)
2018-07-26
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檢測方法的驗證與確認(rèn)的參數(shù)
化學(xué)檢測的對象即分析的目標(biāo)化合物按照性質(zhì)可以分為不得檢出的物質(zhì) (禁用物質(zhì)) 、限制使用的物質(zhì) (已制定最高允許殘留限量物質(zhì)) 和無限制使用物質(zhì)這三類。因此, 在對化學(xué)檢測方法進(jìn)行驗證和確認(rèn)過程中制訂相關(guān)技術(shù)指標(biāo)的試驗方案及結(jié)果評價時, 也應(yīng)充分考慮這三類物質(zhì)的不同特性來控制執(zhí)行。國際部分技術(shù)組織針對化學(xué)檢測實驗室的方法驗證與確認(rèn)都提出了相關(guān)的技術(shù)要求, GB/T27404-2008標(biāo)準(zhǔn)等文件也給出方法確認(rèn)與驗證可參考的技術(shù)參數(shù)。從方法驗證與確認(rèn)參數(shù)的科學(xué)性和有效性論證角度看, 化學(xué)檢測方法驗證的技術(shù)指標(biāo)可分為方法的校準(zhǔn)曲線、回收率、精密度、準(zhǔn)確度 (正確度) 試驗。而非標(biāo)方法的確認(rèn)技術(shù)指標(biāo)除了方法的校準(zhǔn)曲線、回收率、精密度、準(zhǔn)確度 (正確度) 試驗以外, 還需要進(jìn)行方法的特異性、耐用性和測量不確定度評估等確認(rèn)。
1 方法的校準(zhǔn)曲線
實驗室認(rèn)可的實驗室應(yīng)確定檢測方法校準(zhǔn)曲線的數(shù)學(xué)方程以及校準(zhǔn)曲線的工作范圍, 濃度范圍盡可能覆蓋一個數(shù)量級, 至少作5個點 (不包括空白) 。對于篩選方法 (即指定性方法或半定量方法) , 方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.98, 對于確證方法 (即能準(zhǔn)確定量的方法) , 方法線性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不應(yīng)低于0.99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。
2 方法的回收率
方法的回收率代表了測試人員操作檢測過程所獲得測試結(jié)果的準(zhǔn)確性?？紤]到被測物的濃度水平會影響到回收率試驗結(jié)果的高低, 因此, 在進(jìn)行方法的回收率驗證試驗時, 對于禁用物質(zhì), 回收率應(yīng)在方法測定低限 (LOD) 、兩倍方法測定低限和十倍方法測定低限進(jìn)行三水平試驗;對已制定最高殘留限量MRL的最大化學(xué)殘留量, 回收率應(yīng)在方法LOD、MRL、選一合適點進(jìn)行三水平試驗;對于未制定MRL的, 回收率應(yīng)在方法LOD、常見限量指標(biāo)、選一合適點進(jìn)行三水平試驗。每一水平做雙平行?？蓞⒖急?給出的數(shù)據(jù)進(jìn)行回收率結(jié)果的評價。
表1.回收率可接受范圍
3 方法的精密度
方法的精密度代表了測試人員操作檢測過程所獲得測試結(jié)果的穩(wěn)定水平。在進(jìn)行方法的精密度驗證試驗時, 對于禁用物質(zhì), 精密度試驗應(yīng)在LOD、兩倍LOD和十倍LOD三個水平進(jìn)行;對于已制定MRL的, 精密度試驗應(yīng)在LOD、MRL、選一合適點三個水平進(jìn)行;對于未制定MRL的, 精密度試驗應(yīng)在LOD、常見限量指標(biāo)、選一合適點三個水平進(jìn)行。每一濃度水平的重復(fù)測定次數(shù)>6。精密度測試的結(jié)果可通過實驗室內(nèi)的變異系數(shù) (CV=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值) 來表達(dá), 標(biāo)準(zhǔn)偏差s可通過貝塞爾Bessel公式計算得到, 并可參考表2給出的數(shù)據(jù)進(jìn)行精密度結(jié)果的評價。
表2.實驗室內(nèi)變異系數(shù)
4 方法的準(zhǔn)確度
方法的準(zhǔn)確度又可稱為方法的正確度, 指的是重復(fù)分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì) (實物標(biāo)樣) 或水平測試樣品, 測定的含量經(jīng)回收率校正后, 得出測定值與真值的偏差范圍?？蓞⒖急?給出的數(shù)據(jù)進(jìn)行準(zhǔn)確度結(jié)果的評價。
表3.實驗室內(nèi)變異系數(shù)
5 方法的特異性
實驗室在使用非標(biāo)方法、實驗室設(shè)計 (制定) 的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過的標(biāo)準(zhǔn)方法時, 有必要對使用方法的特異性進(jìn)行確認(rèn), 因為僅僅基于色譜分析的技術(shù)手段不能準(zhǔn)確地區(qū)分同一分子量的物質(zhì) (同分異構(gòu)體) 。對于能夠準(zhǔn)確定量檢測的方法要保證檢測的結(jié)果準(zhǔn)確性, 避免異構(gòu)體結(jié)果的誤判, 因此就應(yīng)該根據(jù)待測物的化學(xué)結(jié)構(gòu)信息、使用分子光譜等技術(shù)才能滿足方法的特異性。方法的特異性確認(rèn)可采用如下的技術(shù)手段:
1) 氣相色譜分析結(jié)果再用氣相色譜質(zhì)譜分析技術(shù)確證;
2) 液相色譜分析結(jié)果再用液相色譜質(zhì)譜分析技術(shù)確證;
3) 免疫親和色譜分析結(jié)果再用氣相色譜質(zhì)譜分析技術(shù)確證;
4) 氣相色譜分析結(jié)果再用紅外光譜分析技術(shù)確證;
5) 液相色譜分析結(jié)果再用免疫層析分析技術(shù)確證。
6 方法的抗干擾性和耐用性
實驗室采用的非標(biāo)方法應(yīng)具有對測試過程中可影響測試結(jié)果因素的抗干擾能力, 當(dāng)測試條件發(fā)生細(xì)小變動時, 方法可具有一定的保持測試結(jié)果不受影響的耐受程度, 方法的技術(shù)條件應(yīng)滿足最大的波動影響, 并且設(shè)備、試劑、操作過程等應(yīng)具有盡可能廣泛的適用性和耐用性, 不宜具有嚴(yán)苛的要求。
實驗室只有做好方法驗證和方法確認(rèn), 才能用測試數(shù)據(jù)真實地證明實驗室使用標(biāo)準(zhǔn)方法的操作能力, 證明所使用的非標(biāo)方法具有的科學(xué)性、適用性、準(zhǔn)確性和有效性, 達(dá)到確保實驗室檢測結(jié)果準(zhǔn)確無誤的目的。
