化學實驗室檢測方法的驗證與確認的參數
2018-07-26
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檢測方法的驗證(zheng)與確認(ren)的參(can)數
化(hua)學檢(jian)(jian)測的(de)(de)對象即分析的(de)(de)目(mu)標(biao)化(hua)合物(wu)按照性(xing)質(zhi)(zhi)(zhi)可(ke)以分為不得檢(jian)(jian)出(chu)的(de)(de)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi) (禁用(yong)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)) 、限(xian)制(zhi)使(shi)用(yong)的(de)(de)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi) (已制(zhi)定最高(gao)允許(xu)殘留(liu)限(xian)量物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)) 和無(wu)限(xian)制(zhi)使(shi)用(yong)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)這三類(lei)。因此, 在對化(hua)學檢(jian)(jian)測方(fang)法(fa)進行驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)和確(que)(que)(que)認(ren)過程(cheng)中制(zhi)訂相關技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)指標(biao)的(de)(de)試驗(yan)(yan)(yan)(yan)方(fang)案及結果(guo)評價時, 也(ye)應充(chong)分考(kao)慮這三類(lei)物(wu)質(zhi)(zhi)(zhi)的(de)(de)不同特(te)性(xing)來控制(zhi)執行。國際(ji)部分技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)組織(zhi)針對化(hua)學檢(jian)(jian)測實(shi)驗(yan)(yan)(yan)(yan)室的(de)(de)方(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)與(yu)(yu)確(que)(que)(que)認(ren)都提出(chu)了(le)相關的(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)要求, GB/T27404-2008標(biao)準(zhun)(zhun)等(deng)文件也(ye)給(gei)出(chu)方(fang)法(fa)確(que)(que)(que)認(ren)與(yu)(yu)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)可(ke)參考(kao)的(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)參數。從方(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)與(yu)(yu)確(que)(que)(que)認(ren)參數的(de)(de)科(ke)學性(xing)和有效性(xing)論(lun)證(zheng)角(jiao)度(du)看, 化(hua)學檢(jian)(jian)測方(fang)法(fa)驗(yan)(yan)(yan)(yan)證(zheng)的(de)(de)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)指標(biao)可(ke)分為方(fang)法(fa)的(de)(de)校準(zhun)(zhun)曲(qu)線、回收(shou)率(lv)、精密(mi)度(du)、準(zhun)(zhun)確(que)(que)(que)度(du) (正(zheng)確(que)(que)(que)度(du)) 試驗(yan)(yan)(yan)(yan)。而非標(biao)方(fang)法(fa)的(de)(de)確(que)(que)(que)認(ren)技(ji)(ji)術(shu)(shu)(shu)指標(biao)除了(le)方(fang)法(fa)的(de)(de)校準(zhun)(zhun)曲(qu)線、回收(shou)率(lv)、精密(mi)度(du)、準(zhun)(zhun)確(que)(que)(que)度(du) (正(zheng)確(que)(que)(que)度(du)) 試驗(yan)(yan)(yan)(yan)以外, 還需要進行方(fang)法(fa)的(de)(de)特(te)異(yi)性(xing)、耐用(yong)性(xing)和測量不確(que)(que)(que)定度(du)評估等(deng)確(que)(que)(que)認(ren)。
1 方法的校準(zhun)曲線(xian)
實驗室認可的實驗室應確定檢測方法校準曲線的數學方程以及校準曲線的工作范圍, 濃度范圍盡可能覆蓋一個數量級, 至少作5個點 (不包括空白) 。對于篩選方法 (即指定性方法或半定量方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.98, 對于確證方法 (即能準確定量的方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準曲線的線性范圍內。
2 方法的回收(shou)率(lv)
方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)回收(shou)率(lv)(lv)(lv)代表(biao)了測(ce)(ce)試(shi)(shi)人員操(cao)作檢測(ce)(ce)過(guo)程所(suo)獲得測(ce)(ce)試(shi)(shi)結(jie)(jie)果(guo)的(de)準確(que)性。考慮到(dao)被測(ce)(ce)物的(de)濃度(du)水平會影響到(dao)回收(shou)率(lv)(lv)(lv)試(shi)(shi)驗(yan)結(jie)(jie)果(guo)的(de)高低(di), 因此, 在(zai)(zai)進行(xing)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)的(de)回收(shou)率(lv)(lv)(lv)驗(yan)證(zheng)試(shi)(shi)驗(yan)時, 對于禁用物質, 回收(shou)率(lv)(lv)(lv)應在(zai)(zai)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)測(ce)(ce)定(ding)低(di)限(xian) (LOD) 、兩(liang)倍方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)測(ce)(ce)定(ding)低(di)限(xian)和十(shi)倍方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)測(ce)(ce)定(ding)低(di)限(xian)進行(xing)三(san)水平試(shi)(shi)驗(yan);對已制定(ding)最(zui)高殘(can)留(liu)限(xian)量(liang)MRL的(de)最(zui)大化學殘(can)留(liu)量(liang), 回收(shou)率(lv)(lv)(lv)應在(zai)(zai)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)LOD、MRL、選(xuan)一(yi)合適(shi)點(dian)進行(xing)三(san)水平試(shi)(shi)驗(yan);對于未制定(ding)MRL的(de), 回收(shou)率(lv)(lv)(lv)應在(zai)(zai)方(fang)(fang)法(fa)(fa)(fa)LOD、常見限(xian)量(liang)指標、選(xuan)一(yi)合適(shi)點(dian)進行(xing)三(san)水平試(shi)(shi)驗(yan)。每一(yi)水平做(zuo)雙平行(xing)。可參考表(biao)1給出的(de)數據進行(xing)回收(shou)率(lv)(lv)(lv)結(jie)(jie)果(guo)的(de)評價(jia)。
表1.回收率可接受范圍
3 方法(fa)的精密度(du)
方法的(de)(de)精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)代表了測(ce)試(shi)(shi)人員操作檢測(ce)過(guo)程所獲得(de)測(ce)試(shi)(shi)結果(guo)的(de)(de)穩定水(shui)平(ping)。在進(jin)行(xing)方法的(de)(de)精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)驗(yan)(yan)(yan)證試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)時, 對(dui)(dui)于(yu)禁用(yong)物(wu)質, 精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)應在LOD、兩倍LOD和十倍LOD三個(ge)水(shui)平(ping)進(jin)行(xing);對(dui)(dui)于(yu)已制定MRL的(de)(de), 精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)應在LOD、MRL、選一合適點三個(ge)水(shui)平(ping)進(jin)行(xing);對(dui)(dui)于(yu)未(wei)制定MRL的(de)(de), 精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)試(shi)(shi)驗(yan)(yan)(yan)應在LOD、常(chang)見限(xian)量指標、選一合適點三個(ge)水(shui)平(ping)進(jin)行(xing)。每一濃度(du)(du)(du)(du)水(shui)平(ping)的(de)(de)重(zhong)復(fu)測(ce)定次數>6。精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)測(ce)試(shi)(shi)的(de)(de)結果(guo)可通過(guo)實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室內的(de)(de)變異系數 (CV=標準偏差/平(ping)均(jun)值) 來(lai)表達, 標準偏差s可通過(guo)貝(bei)塞爾Bessel公式計算得(de)到, 并可參考表2給(gei)出的(de)(de)數據進(jin)行(xing)精(jing)(jing)(jing)密(mi)(mi)度(du)(du)(du)(du)結果(guo)的(de)(de)評(ping)價。
表2.實驗室內變異系數
4 方法(fa)的準確度(du)
方法的(de)準確度又可(ke)稱為方法的(de)正確度, 指的(de)是重復分析(xi)標準物質 (實(shi)物標樣) 或水(shui)平測試(shi)樣品, 測定(ding)的(de)含量(liang)經回收率校正后, 得出測定(ding)值與真值的(de)偏差范(fan)圍(wei)。可(ke)參考表(biao)3給出的(de)數(shu)據進行準確度結果的(de)評價。
表3.實驗室內變異系數
5 方法的特異性
實驗室(shi)在使(shi)用(yong)(yong)非標(biao)方法(fa)、實驗室(shi)設計 (制定) 的(de)方法(fa)、超出其(qi)預(yu)定范(fan)圍(wei)使(shi)用(yong)(yong)的(de)標(biao)準(zhun)方法(fa)、擴充和(he)修改(gai)過的(de)標(biao)準(zhun)方法(fa)時, 有必要(yao)對使(shi)用(yong)(yong)方法(fa)的(de)特(te)異(yi)性(xing)進行確(que)認(ren), 因為僅僅基于(yu)色譜分(fen)(fen)析的(de)技術(shu)手段(duan)不能(neng)準(zhun)確(que)地(di)區(qu)分(fen)(fen)同一分(fen)(fen)子量的(de)物質 (同分(fen)(fen)異(yi)構體) 。對于(yu)能(neng)夠準(zhun)確(que)定量檢測(ce)的(de)方法(fa)要(yao)保證檢測(ce)的(de)結果準(zhun)確(que)性(xing), 避免異(yi)構體結果的(de)誤判, 因此就應該根(gen)據待測(ce)物的(de)化學結構信息、使(shi)用(yong)(yong)分(fen)(fen)子光譜等技術(shu)才能(neng)滿足方法(fa)的(de)特(te)異(yi)性(xing)。方法(fa)的(de)特(te)異(yi)性(xing)確(que)認(ren)可采用(yong)(yong)如(ru)下的(de)技術(shu)手段(duan):
1) 氣(qi)相色譜(pu)(pu)分析結果再用氣(qi)相色譜(pu)(pu)質譜(pu)(pu)分析技(ji)術確證;
2) 液(ye)相(xiang)色譜分析(xi)(xi)結果再用液(ye)相(xiang)色譜質譜分析(xi)(xi)技術確證(zheng);
3) 免疫親(qin)和(he)色譜(pu)分析結果再用氣(qi)相色譜(pu)質譜(pu)分析技術確證(zheng);
4) 氣相色(se)譜分析結果(guo)再用紅外光譜分析技術確證;
5) 液相色譜分(fen)析(xi)結果(guo)再(zai)用免疫(yi)層(ceng)析(xi)分(fen)析(xi)技術確證(zheng)。
6 方法的抗干(gan)擾性(xing)和耐用性(xing)
實驗室(shi)采(cai)用的(de)(de)(de)非標方(fang)法應(ying)具有(you)對(dui)測(ce)試(shi)過程中可(ke)影響測(ce)試(shi)結果因素(su)的(de)(de)(de)抗干擾能力(li), 當(dang)測(ce)試(shi)條件發生細小變動時, 方(fang)法可(ke)具有(you)一定的(de)(de)(de)保持測(ce)試(shi)結果不受(shou)影響的(de)(de)(de)耐(nai)受(shou)程度, 方(fang)法的(de)(de)(de)技術條件應(ying)滿足最大的(de)(de)(de)波動影響, 并且設備、試(shi)劑、操作過程等(deng)應(ying)具有(you)盡可(ke)能廣泛(fan)的(de)(de)(de)適用性和耐(nai)用性, 不宜具有(you)嚴苛的(de)(de)(de)要求。
實(shi)驗(yan)室(shi)只有(you)做好方(fang)法驗(yan)證和(he)方(fang)法確(que)認(ren), 才能用(yong)測試數據(ju)真(zhen)實(shi)地(di)證明(ming)實(shi)驗(yan)室(shi)使用(yong)標準方(fang)法的(de)(de)操作能力, 證明(ming)所使用(yong)的(de)(de)非標方(fang)法具(ju)有(you)的(de)(de)科學性(xing)、適用(yong)性(xing)、準確(que)性(xing)和(he)有(you)效性(xing), 達到確(que)保實(shi)驗(yan)室(shi)檢測結果準確(que)無誤的(de)(de)目的(de)(de)。
